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服務詳情
(一)核體系雙雜篩選: 通過轉錄活化蛋白結合DNA上特異的序列而啟動相關基因的轉錄反應,轉錄活化蛋白分別由相互獨立的DNA 結合結構域(BD)和轉錄活化結構域(AD),通常情況下BD可以與GAL4上游活化序列(GALUAS)結合但不能引起轉錄,單獨的AD也不能與GALUAS結合,只有當BD與AD分別表達的融合蛋白發生相互作用,兩者在空間上相互靠近才能與GALUAS結合并且引起報道基因的轉錄。
專業服務優勢: A、文庫選擇優勢: 1.定制一庫四用(單雜、雙雜、三雜、過表達載體文庫)的特色酵母文庫:使用優化后的clonetech的pGADT7-Rec2、GATEWAY二次重組法和“一步法重組”文庫; 2.提供商品化酵母cDNA文庫。 B、篩選服務優勢: 酵母核體系雙雜交系統可研究蛋白與蛋白二元之間的相互作用方式,篩選步驟優化,具有成熟的實驗操作流程,提供真實可靠的實驗數據及原始圖片。 C、篩選后可同時進行高通量篩選Y2H-seq。
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(二)膜體系雙雜篩選: 利用分離的泛素系統(split-ubiquitin)進行跨膜蛋白相互作用的篩選。分離的泛素系統由N 端(Nub)和C 端(Cub)組成,通常兩者具有很強的親合力,可表現出野生型泛素的功能。現將Nub的3位異亮氨酸突變為甘氨酸(NubI 突變為 NubG),降低與Cub 的親合力;同時將 Cub 部分與人工合成的 LexA 轉錄激活因子融合成一個融合蛋白Cub-LexA;z后將要驗證的蛋白質分別與 NubG 和 Cub-LexA融合,形成 bait 融合蛋白(bait-cub-LexA)和 prey 融合蛋白(prey-NubG),如果 bait 和 prey 發生相互作用,即 NubG 和 Cub 的相互接近,會被UBPs 識別,使 LexA 切割,進入核內從而激活報告基因的轉錄。
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專業服務優勢: A、文庫選擇優勢: 1.定制一庫四用(單雜、雙雜、三雜、過表達載體文庫)的特色酵母文庫:使用優化后的clonetech的pGADT7-Rec2、GATEWAY二次重組法和“一步法重組”文庫; 2.提供商品化酵母cDNA文庫。 B、篩選服務優勢: 酵母膜體系雙雜交系統可研究膜蛋白或細胞質蛋白與蛋白二元之間的相互作用方式,篩選步驟優化,具有成熟的實驗操作流程,提供真實可靠的實驗數據及原始圖片。 C、篩選后可同時進行高通量篩選Y2H-seq。
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